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                      產品詳情
                      • 產品名稱:小鼠NK細胞

                      • 產品型號:
                      • 產品廠商:佰曄生物
                      • 產品文檔:
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                      簡單介紹:
                      小鼠NK細胞
                      詳情介紹:

                      產品基本信息

                      細胞名稱: 小鼠NK細胞
                      種屬來源: 小鼠
                      組織來源: 實驗動物的正常外周血組織
                      疾病特征: 正常原代細胞
                      細胞形態: 圓形或橢圓形細胞,不規則細胞
                      生長特性: 貼壁生長
                      培養基: 我們推薦使用EliteCell原代NK細胞培養體系(產品編號:PriMed-EliteCell-025)作為體外培養原代NK細胞的培養基。
                      生長條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, 
                      傳代方法: 1:2至1:6,每周2次。
                      凍存條件: 90% 完全培養基+10% DMSO,液氮儲存
                      細胞鑒定: CD56和CD16免疫熒光染色為陽性,經鑒定細胞純度高于90%。
                      QC檢測: 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。


                      小鼠NK細胞特點和簡介

                      自然殺傷細胞(natural killer cell,NK)是機體重要的免疫細胞,不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調節有關,而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生。一種穩定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子,120kDa,NK細胞在IL-2條件下培養20天LAK-1仍為陽性,而HNK-1(CD57)和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。
                       
                      自然殺傷細胞刺激因子(natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細胞調節素(leukoregulin,LR) 對NK細胞的活化和分化有正調節作用, 體外培養時加入上述細胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質激素等對NK細胞的活性有抑制作用。

                      小鼠NK細胞接受后處理

                      1) 收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發給我們。

                       2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態,去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

                       3) 棄去T25瓶中的培養基,添加 6ml本公司附帶的完全培養基。

                       4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。

                       5) 接到細胞次日,請檢查細胞是 否污染,若發現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系。
                       

                      小鼠NK細胞培養操作

                      1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。**天換液并 檢查細胞密度。

                       2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。      
                         
                           1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

                           2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
                         
                           3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。

                           4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

                       3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;

                          1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

                          2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。

                          3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

                      小鼠NK細胞培養注意事項

                       1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
                       
                       2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等,確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題,責任由客戶自行承擔。

                       3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養;如果染色結果顯示細胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯系,信息確認后我們為您再免費寄送一次。

                       4.   靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內的培養基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養,待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

                       5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用,細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合,使細胞逐漸適應培養條件。

                       6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和 Procell 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯 系,告知細胞的具體情況,以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

                       7.該細胞僅供科研使用。


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                      產品應用舉例

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